如何正确使用40uL全裙边384孔PCR板

　　如何正确使用40uL全裙边384孔PCR板

　　40μL全裙边384孔PCR板‌的正确使用需遵循严格的实验规范，以确保扩增效率、数据准确性和操作安全性。以下是关键步骤与注意事项：

　　一、使用前准备

　　检查耗材状态‌

　　确认PCR板无裂纹、变形或污染，避免因物理损伤导致密封失效或热传导不均。

　　环境与工具准备‌

　　在超净台内操作，紫外照射30分钟以减少核酸污染风险。

　　使用无粉手套、无菌移液器及低吸附吸头，防止RNase/DNase污染。

　　试剂与布板设计‌

　　冰上解冻试剂，轻柔混匀后短暂离心(1000×g, 1 min)去除气泡。

　　绘制384孔布板图，标注样本、内参、阴性/阳性对照，并优先将对照设于边缘孔以抵消边缘效应。

　　二、加样操作规范

　　方向定位‌

　　将PCR板双切角(A24/P24定位)朝向左上方，确保与PCR仪模块和移液头方向一致，防止加样错位。

　　加样顺序与技巧‌

　　先加入MasterMix，再加模板DNA或引物。

　　使用多通道移液器(8/16通道)，校准至2–40 μL量程，吸头距孔底1–2 mm缓慢推出液体，避免产生气泡。

　　单孔反应体积建议控制在‌2–25 μL‌，最大不超过30 μL，以防热封时溢出。

　　除气泡处理‌

　　加样后立即进行短离心(2000–3000×g, 2–5 min)，使液体沉底并排出气泡。

　　三、密封与上机

　　封膜要求‌

　　使用‌光学透明粘性封板膜‌(qPCR专用)，从一端缓慢贴合，避免褶皱或气泡。

　　用压板器或银行卡水平+垂直各压2次，重点压实四角与边缘。

　　可选热封(105–110℃, 2–3 s)增强密封性，但需注意避免过度加热导致板体变形。

　　上机设置‌

　　将PCR板平稳放入384孔加热模块，双切角与仪器定位槽对齐，确保贴合。

　　关闭热盖，压力适中，防止压碎板体或造成漏液。

　　若使用Roche LightCycler 480 II等设备，务必使用匹配的384孔板与光学盖膜。

　　注：以上供参考!

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