有没有ELISA结果判读的常见问题解答

　　有没有ELISA结果判读的常见问题解答

　　ELISA结果判读常见问题解答，365上市公司官网BUNSEN技术老师验后的数据困惑总结：

　　一、基础判定类问题

　　阳性/阴性/不确定结果分别代表什么?‌

　　阳性：样本OD值高于试剂盒设定的Cut-off临界值，提示检出目标物;阴性：OD值低于临界值，未检出目标物;不确定：OD值落在临界值附近的灰区，无法直接判定，需重复检测或用其他方法验证。

　　样本OD值低于空白值，是实验失败了吗?‌

　　不一定。少量样本出现该情况多是操作误差，增加重复孔即可;大量样本出现则大概率是基质效应，可通过稀释样本、用含动物血清的PBS配制校正曲线来修正。

　　二、标准曲线相关问题

　　标准曲线R²达不到0.99，还能用吗?‌

　　不建议直接使用。R²低于0.98时，所有样本的浓度计算误差会明显增大，优先排查标准品稀释梯度是否出错、移液器是否校准、复孔是否有跳点，修正后重新拟合曲线。

　　高浓度标准品OD值反而比低浓度低，是什么原因?‌

　　这是典型的‌钩状效应，高浓度抗原占据所有抗体结合位点，无法形成有效夹心复合物，信号反而下降，将高浓度样本梯度稀释后重新检测即可恢复正常。

　　三、异常结果类问题

　　明明是阴性样本，却测出阳性结果(假阳性)，常见原因有哪些?‌

　　多由交叉反应、样本溶血/脂血、洗涤不净、封闭不充分导致，可通过选择高特异性抗体、离心去除样本杂质、增加洗涤次数来降低假阳性概率。

　　预期阳性的样本测出阴性(假阴性)，该怎么排查?‌

　　优先检查样本中目标物浓度是否低于检测限、孵育时间/温度是否不达标、样本是否反复冻融破坏了抗原结构，可尝试浓缩样本、延长孵育时间重新检测。

　　整板都出现高背景、全板发黄，是什么问题?‌

　　大概率是洗板不充分、底物孵育时间过长、封闭步骤失效，可调整为每步洗涤5次、底物避光孵育10-15分钟后及时终止，更换更合适的封闭剂重新实验。

　　四、实操注意事项

　　不同试剂盒的Cut-off值、参考范围存在差异，判读时必须以对应试剂盒的说明书为准。

　　ELISA检测仅作为初筛手段，阳性结果需通过Western Blot、hesuan 检测等方法做最终确认。

　　注：以上科研产品资料供参考!

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